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Presence of a phytoplasma associated with witches’ broom disease in Ugni molinae Turcz. and Gaultheria phillyreifolia (Pers.) Sleumer determined by DAPI, PCR, and DNA sequencing Arismendi, Nolberto S.; Andrade, Nancy S.; Riegel, Ricardo Sch. & Carrillo, Roberto Ll. Abstract Murta ( Ugni molinae Turcz.) and common chaura ( Gaultheria phillyreifolia (Pers.) Sleumer) are native species of Chile. Plants of both species have shown over-branching like witches’ broom. The causal agents of these symptoms in many plants are phytoplasma. To verify the presence of these microorganisms, DAPI (4’,6-diamidino-2-phenylindole) staining analysis and polymerase chain reaction (PCR) were performed in symptomatic and asymptomatic plants. Positive PCR samples were sequenced to identify the pathogens involved. In individuals of both species with witches’ broom symptoms, DAPI staining showed fluorescent bodies in the phloem tissues, but not in asymptomatic plants. Verification by nested-PCR, phytoplasmatic DNA was amplified from diseased murta and chaura, but not in apparently healthy plants. Sequencing of amplified products allowed locating phytoplasma within the ash yellows group (16SrVII) and related to Candidatus phytoplasma fraxini. This is the first report of phytoplasma in Chilean native species. Considering the diversity of plant species infected by the ash yellows group suggests that G. phillyreifolia and U. molinae could be a phytoplasma reservoir for other economically important agricultural crops. Keywords native shrubs, witches’ broom, phytoplasma, microscopic and molecular tools

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Presencia de un fitoplasma asociado a la enfermedad de “escoba de bruja” en Ugni molinae Turcz. y Gaultheria phillyreifolia (Pers.) Sleumer determinado mediante DAPI, PCR y secuenciación de ADN. Arismendi, Nolberto S.; Andrade, Nancy S.; Riegel, Ricardo Sch. & Carrillo, Roberto Ll. Resumen La murta ( Ugni molinae Turcz.) y la chaura común ( Gaultheria phillyreifolia (Pers.) Sleumer) son especies nativas de Chile. En plantas de ambas especies se ha observado una sobre-ramificación de tipo “escoba de bruja”. En muchas plantas los agentes causales de esta sintomatología son fitoplasmas. Para verificar la presencia de estos microorganismos se analizaron plantas con y sin síntomas mediante tinciones DAPI (4’,6-diamidino-2-fenilindol) y reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Muestras positivas en la PCR fueron secuenciadas para identificar al fitopatógeno implicado. En individuos de ambas especies con síntomas de escoba de bruja, la tinción DAPI permitió observar cuerpos fluorescentes en los tejidos del floema, situación que no ocurrió en plantas asintomáticas. En la verificación mediante PCR-anidada, se logró amplificar ADN fitoplasmático en plantas de murta y chaura enfermas, pero no en plantas aparentemente sanas. La secuenciación de los productos amplificados permitió localizar al fitoplasma dentro del grupo “ash yellows” (16SrVII) y relacionado al “Candidatus Phytoplasma fraxini”. Éste es el primer reporte que caracteriza a un fitoplasma en especies nativas chilenas. Considerando la diversidad de especies de plantas infectadas por el grupo ash yellows, sugiere que G. phillyreifolia y U. molinae podrían constituir un reservorio de fitoplasmas para otros cultivos agrícolas de importancia económica. Palabras-clave arbustos nativos, escoba de bruja, fitoplasma, técnicas microscópicas y moleculares

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