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Construcción y expresión de una proteína recombinante de la envoltura del virus linfotrópico humano tipo I (HTLV-I) Paula Ordóñez, Flavio Cerón, Felipe García-Vallejo Resumen El virus linfotrópico humano tipo I de las células T (HTLV-I) es un oncorretrovirus asociado con la leucemia de células T adultas (ATL) y la Paraparesia Espástica Tropical (PET). El gen env del virus codifica la glicoproteína precursora gp62, que mediante procesamiento produce la gp21 (transmembranal) y la gp46 (superficie). Se ha demostrado la alta inmunorreactividad de la gp46 en sueros de individuos infectados. Con el propósito de obtener una proteína recombinante útil en diagnóstico y en una potencial vacuna, se clonó en el vector de expresión de Baculovirus "bácmido" pBlueBac4.5His el segmento de 144bp obtenido mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con cebadores que amplifican la región 5622-5765 nt. El construido pBlueBacRENV fue transfectado en células del insecto Mamestrae brassicae (clon MB 8003) recuperándose la proteína recombinante. La proteína RENV reaccionó específicamente con suero de personas infectadas con HTLV-I. Los resultados obtenidos mostraron que la proteína RENV puede ser utilizada para el diagnóstico serológico de la infección por HTLV-I y en la evaluación de nuevas vacunas. Palabras-clave ADN recombinante. Retrovirus. gp46. HTLV-I. Clonación. Baculovirus

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Paula Ordóñez, Flavio Cerón, Felipe García-Vallejo Abstract Human T-Cell Lymphotropic Virus Type I (HTLV-I) is an oncoretrovirus associated with Adult T-Cell Leukemia/Lymphoma (ATL) and Tropical Spastic Paraparesis (TSP). The viral env gen encodes gp62 glycoprotein precursor that is cleavage to produce the gp21 (transmembrane) and gp46 (surface). Previous reports showed that gp46 is highly immunoreactive in sera from infected individuals. With the purpose to obtain a recombinant protein to be used for diagnosis and potential vaccine, we cloned into Baculovirus expression vector pBluebac4.5His bacmids, the 144bp segment obtained by PCR with primers for 5622-5765 nt region. The construct pBlueBacRENV was transfected into insect cells of Mamestrae brassicae (MB 8003) and the recombinant protein was recovered. The protein showed cross reactions with sera of HTLV-I infected people exclusively. These results enabled us to propose this protein can be used in serologic diagnosis for HTLV-I infection and as a candidate for a vaccine. Keywords Recombinant DNA. Retroviruses. gp46. HTLV-I. Cloning. Baculoviruses

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